扫描电子显微镜（SEM）可以拍摄细胞图像，但需要进行特殊的样品制备步骤来保证细胞在高真空环境下的稳定性和形态保真。以下是细胞样品制备和成像的详细步骤：

1. 样品固定

目的：

固定细胞以保持其结构和形态。

方法：

化学固定：常用的固定剂包括戊二醛（2.5-4%）和甲醛（2-4%），可以有效地固定细胞膜和内部结构。将细胞培养物放入固定剂中，通常需要固定30分钟到1小时。

用缓冲液（如磷酸盐缓冲液PBS）反复冲洗，以去除多余的固定剂。

2. 脱水

目的：

去除细胞中的水分，避免在真空环境下蒸发。

方法：

梯度乙醇脱水：使用一系列逐渐增加浓度的乙醇溶液进行脱水（30%、50%、70%、90%、100%）。每个浓度处理时间为10-15分钟，在纯乙醇中处理两次，每次10-15分钟。

3. 干燥

目的：

将细胞样品完全干燥，避免在真空环境下产生形变。

方法：

临界点干燥：使用临界点干燥仪，通过二氧化碳临界点干燥技术将样品干燥，这是常用的方法。样品在液态二氧化碳中处理，然后通过临界点干燥将液态二氧化碳转换为气态，避免液体表面张力导致的样品形变。

4. 样品涂层

目的：

提高样品的导电性，防止充电效应，获得更清晰的图像。

方法：

金属涂层：在样品表面沉积一层导电材料（如金、铂或碳）。使用溅射镀膜仪或蒸发镀膜仪进行涂层，确保涂层均匀且厚度适中（通常在几纳米到几十纳米之间）。

5. 样品安装

目的：

将样品固定在SEM的样品台上，确保稳定成像。

方法：

导电胶固定：使用导电胶或碳胶带将样品固定在样品台上，确保接触良好。样品台需清洁，样品应牢固固定，避免成像过程中移动。

6. 成像

目的：

使用SEM进行细胞成像。

方法：

调整显微镜设置：

选择适当的加速电压（通常在1-20 kV范围内，具体取决于样品和成像需求）。

设置合适的探针电流和孔径，确保获得清晰图像。

使用低真空模式（如果可用）减少样品充电效应。

优化成像参数：

逐步调整对焦和像散校正，使图像达到适合的清晰度。

使用不同的检测器（如二次电子检测器和背散射电子检测器）获得不同信息的图像。

注意事项

样品处理过程需小心：避免在各个步骤中损坏细胞结构，尤其是在固定和干燥过程中。

环境控制：样品制备过程在干净、无尘的环境中进行，避免污染。

操作人员需熟练：样品制备和SEM操作需要一定的专业知识和经验，确保获得高质量的图像。

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