观察生物样品时，使用扫描电镜（SEM）需要注意以下问题：

样品固定和处理：生物样品在SEM观察前需要进行适当的固定和处理，以保持其形态和结构的稳定性。常见的处理方法包括化学固定、冷冻固定、冻干等，具体方法应根据样品的性质和研究目的来选择。

去除水分：SEM观察需要在真空或低压环境下进行，因此生物样品中的水分需要被去除。常见的方法包括冷冻干燥（冻脱水）或使用无水溶剂进行干燥。

导电性增强：生物样品通常具有较差的导电性，因此需要在SEM观察前增强其导电性。这可以通过金属喷涂、碳喷涂或金属蒸镀等方法来实现，以形成导电的表面。

选择适当的工作距离和加速电压：SEM的工作距离和加速电压对于生物样品的观察至关重要。适当的工作距离和加速电压可以帮助获得清晰的图像，并避免样品受到电子束的热损伤。

防止辐照损伤：电子束辐照可能会对生物样品造成损伤，因此需要控制电子束的扫描时间和电子束的功率。尽量选择低电流和较短的扫描时间，以减少样品的辐照损伤。

选择合适的检测器：SEM常用的检测器包括二次电子检测器（SE）和反射电子检测器（BSE）。根据需要观察的样品特性和细节，选择合适的检测器以获得高质量的图像对比度和细节。

避免图像伪影：在观察生物样品时，应注意避免图像伪影的产生。这可能由于样品表面的充电效应、水分残留或不正确的样品制备导致。在样品制备和SEM操作过程中，应注意减少充电效应和水分残留，以获得更准确的图像。

优化参数和实验条件：根据具体样品和观察需求，不断优化SEM的参数和实验条件。

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